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第五节 固液培养
分枝杆菌固体培养基需时较长，BACTEC MGIT 960等液体培养尽管培养时间较短，但费用较高，且不能获得单个菌落。在固体培养基中加入液体培养基，制成双相培养基，进行分枝杆菌的分离培养，既能缩短培养时间，又能提高培养阳性率，而且不需要特殊仪器设备，检查费用低廉，应用前景看好。
一、方法原理
分枝杆菌双相培养基既含有固体罗氏培养基，又含有营养丰富的液体培养基、促生长剂、抑菌剂、显色剂等成分，能够显著促进分枝杆菌的生长，缩短培养时间，提高培养阳性率。用双相培养基进行分枝杆菌的培养，细菌即可在液体培养基中大量生长，又可以在固体培养基上形成菌落，起到分离培养的目的。同时，由于显色剂的作用，分枝杆菌菌体着色，极易观察。
二、适用范围
与固体和液体培养基相同，适用于所有分枝杆菌的分离培养，也可用于药敏试验。
三、检测样品
与分枝杆菌的固体培养和液体培养相同，适用于所有样本的分离培养。
四、仪器设备
所需仪器设备同固体罗氏培养法。
五、试剂耗材
双相罗氏培养基（有商品化试剂，也可以自制）。
其他试剂和耗材同固体罗氏培养法。
六、操作步骤
痰标本的前处理同罗氏培养基培养法，液化后的待检标本加入生理盐水离心洗涤2次，用1ml生理盐水重悬标本沉淀物，取0.1ml沉淀物滴种于双相培养基的固体斜面上，置37℃温箱培养1～2周报告结果。
七、结果判读
接种2～3天后，观察是否污染，1周后每2天观察结果一次。结果可见在双相培养基的固体斜面上出现肉眼可见的细菌颗粒，也可同时在双相培养基的液体培养基中出现白色颗粒状菌体沉淀。如使用双相罗氏显色培养基，则可见红色细菌颗粒（图4-1）。
图4-1 H 37Rv标准株在双相罗氏显色培养基上生长结果示例
（1～7为不同H 37Rv接种浓度培养结果，8为阴性结果）
八、临床意义
双相罗氏培养基培养时间只需2～4周，比常规罗氏培养基提早2～4周；培养阳性率也比罗氏培养基提高5%～10%。与MGIT 960相比，两者的培养时间和培养阳性率基本相似。
九、拓展文献
1.国家发明专利ZL 200510025612.7，专利发明人胡忠义，专利名称:双相罗氏培养基及其制备方法
2.Zhenling Cui，Jie Wang，Changtai Zhu，et al.Evaluation of a Novel Biphasic Culture Medium for Recovery of Mycobacteria:A Multi-Center Study.PLoS One，2012，7（4）:e36331.